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標準菌種使用需要注意的地方及保存的方法

更新時間:2020-09-11瀏覽:2082次
       標準菌種使用注意事項:
  1、標準菌種是不可以從冰箱中取出直接使用的,需在實驗前進行活化;
  2、從標準菌株到實驗使用的菌懸液的傳代次數應不得超過5代,以防止過度的傳代增加菌種變異的風險。在2015版藥典“9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則”中明確指出:任何形式的轉種均被認為是傳代1次。
  3、標準菌株復蘇后的一代,一般是不保存的,因為菌種剛剛從凍干粉的狀態復蘇,活性還未恢復到不錯的狀態,再復壯而得的二代菌種,也就是標準儲備菌株,需進行純度和特性的確認,這個確認記錄可證明在操作過程中,菌株未污染雜菌且活性與標準菌株一致。
  4、保藏時應選擇適宜的菌種保存方法,并注意標示必須清晰明確。由于在試驗過程中,實驗菌種的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件,大家也越來越重視實驗菌種的狀態,如果保藏方法及管理不善,菌種優良特性便會退化、喪失,甚至導致死亡,就會影響實驗結果。
  標準菌種的保存使用
  1、新引進的菌種經形態、染色、培養性狀、生化特性等的鑒別確定后作記錄,并進行保存。
  2、長期保存的儲存菌株以冷凍干燥保藏為主,特殊要求的菌種可用其它方法進行保存,保存期可長達幾年至幾十年。
  3、半儲存菌株以含20%甘油的肉湯或液體石臘封存的半固體瓊脂為主,在0℃以下保存,保存期為3-6個月。
  4、應用菌株以瓊脂斜面為主,在4℃保存,保存期為1-3個月。
  5、菌種的傳代不可超過6次。視菌種的特性及使用情況,一般儲存菌株每5年傳記代一次,每1-2年從儲存菌株轉接至半儲存菌株,半儲存菌株每3-6個月傳代一次,每1-3個月從半儲存菌株轉接接至應用菌株。
  6、每次檢驗用的菌株必須是從應用菌株轉接的新鮮菌株。每支應用菌株用兩次后必須銷毀(121℃,0.1MPa高壓滅菌處理15分鐘以上)。
  7、各級保存的菌株應有明確的編號、名稱、傳代數、日期等到標識。
  8、菌種的收發、保存、使用、傳代等應及時認真詳細地登記,以備查核。
  9、在保存過程中,如發生污染退化等問題,應及時報告,以便處理。
  倍增時間不是代數,倍增時間是菌株特性,不同菌株起菌快慢不一樣,具體工藝需要結合倍增時間、培養基及生長曲線等進行設計
  對數生長期細胞的生長速率快速拉升,期間微生物的比生長速率大,且菌體生長不受基質濃度限制,繁殖速率極快,細胞數量或質量等生物量一般呈指數增長,根據比生長速率定義有:
  μ=dCX/dt?1/CX
  積分變形可得:
  lnCX1=lnCX0+μ?t
  繼續變形:
  μ?t=(lnCX1-lnCX0)
  則倍增時間td:
  =lnCX1-lnCX0/μmax
  =ln(2/1)/μmax
  =0.693/μmax
  其中:
  μ:比生長速率
  CX0:起始菌體濃度(g/L)
  CXt:經過一段時間t后的菌體濃度(g/L)
  CX:菌體濃度泛指(g/L)
  td:菌體濃度增大一倍時所需要的時間min
  
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